Časté otázky o odstredivých filtračných zariadeniach
Q1. Je potrebné oddeliť proteíny s rôznymi molekulovými hmotnosťami, takže aký veľký rozdiel by mali molekulové hmotnosti proteínov potrebovať?
Odpoveď: Veľkosť týchto dvoch proteínov sa musí líšiť 10-krát alebo viac.
Q2. Môže odstreďovaťAlbyť filtračné zariadenia sterilizované a odolné voči alkalickému praniu?
Odpoveď: Môže sa sterilizovať 75-percentným vodným roztokom etanolu a membrána vydrží 0.1-0.5N alkalické umývanie hydroxidom sodným.
Q3. Ako sa vysporiadať s tým, ak sa proteín pri koncentrácii vyzrážal?
Odpoveď: Ak je proteín koncentrovaný príliš rýchlo alebo príliš koncentrovaný, môže to spôsobiť zrážanie proteínu a konečná koncentrácia proteínu po koncentrácii by nemala byť príliš vysoká; Proteíny, ktoré sú citlivé na rýchlosť koncentrácie a majú tendenciu sa zrážať, navrhli metódu zlepšenia:
Znížte odstredivú rýchlosť
Použite ultrafiltračnú membránu s vyššou hranicou molekulovej hmotnosti
Koncentrovanú skúmavku prefúknite a vysajte a potom odstreďte
Q4. Aký je možný dôvod, prečoodstredivé filtračné zariadenianedá sa odstrediť?
Odpoveď: Na počiatočné odstreďovanie môžete použiť približne 20-percentný vodný roztok etanolu, ak sa ultrafiltračná skúmavka nedá odstrediť, pretože ultrafiltračná membrána je úplne suchá, povrch membrány je slabo hydrofóbny a tok je možné po infiltrácii obnoviť s nízkou rozpúšťadlo povrchového napätia.
Q5. Správne spôsoby používania a skladovania odstredivých filtračných zariadení
Odpoveď: Odstredivé filtračné zariadenia by sa mali pred použitím odstrediť s čistenou vodou, aby sa overila ich integrita. Po každom použití je potrebné skladovať v mokrom stave, aby sa zabránilo vysychaniu membrány.
Q6. Ako odstredivé filtračné zariadenia odstraňujú endotoxín?
Odpoveď: Odstredivé filtračné zariadenia, ktoré sme poskytli, neboli ošetrené endotoxínmi, a pretože endotoxíny sa v prírode vyskytujú vo veľkej miere, vzorky, ktoré vyžadujú endotoxíny, možno pred experimentom vopred vyčistiť 0.5N hydroxidom sodným a potom umyť RO vody na odstránenie väčšiny endotoxínu.
Q7. Keď sa koncentrovaný proteín použije na následnú analýzu, zistí sa, že dochádza k interferencii, aký je dôvod?
Odpoveď: Odstredivé filtračné zariadenia môžu byť vopred premyté tlmivým roztokom alebo čistenou vodou. Ak interferencia stále existuje, umyte ju 0.1N hydroxidom sodným a potom umyte čistenou vodou.
Q8. IZistilo sa, že po koncentrácii nie je v koncentráte žiadny cieľový proteín. Aké sú možné dôvody?
Odpoveď: 1) Počiatočná koncentrácia proteínu by nemala byť príliš nízka, ak je koncentrácia príliš nízka, membrána sa nemusí udržať.
2) Vyberte vhodnú veľkosť pórov membrány. Odstredivá koncentrácia filtračnej skúmavky patrí do slepej filtrácie a veľkosť pórov membrány je vo všeobecnosti menšia ako 2-krát alebo väčšia ako cieľový proteín.
3) Zvoľte správnu odstredivú rýchlosť
4) Či sa cieľový proteín vyzráža
Q9. Pasivačná úprava odstredivých filtračných zariadení
Odpoveď: Pasivačná predúprava povrchu odstredivých filtračných zariadení môže znížiť adsorpčnú stratu proteínu na povrchu membrány, vo väčšine prípadov môže predúprava kolóny pred koncentráciou zriedeného proteínového roztoku zlepšiť regeneráciu, pretože roztok môže vyplniť exponovaný prázdne miesta adsorpcie proteínov na membráne a povrchu, pasivačná metóda je vopred namočiť kolónu veľkým objemom pasivačného roztoku na viac ako 1 hodinu, kolónu dôkladne prepláchnuť destilovanou vodou a potom kolónu raz odstrediť destilovanou vodou na úplné odstránenie pasivačného roztoku, ktorý môže zostať na membráne, dávajte pozor, aby membrána po pasivácii nevyschla, ak si ju chcete ponechať pre budúce použitie, je potrebné pridať sterilnú destilovanú vodu, aby bola membrána vlhká., kontaktujte naši inžinieri pre bežné pasivačné riešenia.
Q10. Filtruje ultrafiltračná membrána molekuly hierarchicky?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 percent pri použití 100 kD ultrafiltračnej membrány však molekuly menšie ako veľkosť pórov membrány úplne voľne neprechádzajú. Miera molekulárnej retencie 67 kd je viac ako 70 percent a proteín s hmotnosťou 43 kd je tiež viac ako 40 percent odrezaný, rôzne zložky v zmiešanom roztoku prechádzajú cez membránu nie také jednoduché a ľahké ako jednozložkový roztok, v praxi , ak chcete izolovať dve makromolekuly, rozdiel molekulovej hmotnosti medzi nimi by mal byť osemkrát alebo viac.
Q11. Ako efektívne oddeliť veľké a malé molekuly pomocou ultrafiltrácie?
Odpoveď: Kvôli potrebám procesu sa odstránia nečistoty z makromolekúl, prípadne sa z makromolekúl odstránia malé molekuly, to je pri výrobe normálne. Je veľmi potrebné zvoliť vhodnú veľkosť pórov membrány, spôsob filtrácie a prevádzkové podmienky. Všeobecne povedané, ak sa špecifikácia MWCO membrány vyberie medzi dvoma proteínmi, možno dosiahnuť relatívne ideálnu separáciu. Ak je proteínový roztok relatívne zriedený, k dosiahnutiu lepších výsledkov pomôže aj prevádzka pod nízkym tlakom. Vyberte filtráciu s tangenciálnym prietokom a vykonajte viacnásobnú diafiltráciu, aby ste dosiahli lepší separačný efekt.
