Technológia navádzania vám umožní naučiť sa jednoduchý a efektívny spôsob odsoľovania a koncentrácie

Proteíny je často potrebné po separácii a čistení odsoliť a tieto soli pochádzajú najmä z rôznych iónov v živých organizmoch (napr. sodíkové ióny, draselné ióny, chloridové ióny atď.), ako aj tlmivé soli v extraktoch, soli v eluenty a zložky solí určitých denaturačných činidiel používaných na experimenty. Vysoká koncentrácia soli môže ovplyvniť aktivitu a stabilitu proteínov, ako aj ich interakcie s inými molekulami, vytvárať rušivé signály alebo znižovať presnosť meraní v následných analytických metódach, ako je elektroforéza, hmotnostná spektrometria a kryštalografické štúdie. Preto je veľmi potrebné vyčistené proteíny po separácii odsoliť, pričom hlavnými často používanými metódami odsoľovania sú membránová (dialýza a ultrafiltrácia) a gélová filtračná chromatografia. Okrem toho v niektorých prípadoch možno odsoľovanie dosiahnuť aj riedením.

 

Dialyzačné odsoľovanie, kvôli dlhému cyklu a potrebe veľkého množstva náhradných tekutín, je jeho použitie značne obmedzené a menej používané v priemysle, ale hlavne čiastočne laboratórne, laboratórium sa postupne nahrádza ultrafiltračnými trubicami /ultrafiltračný pohár.

 

Hlavnou membránovou separačnou technológiou používanou v procese odsoľovania a koncentrácie bielkovín je ultrafiltrácia. Ultrafiltrácia je membránová separačná technológia s vysokou účinnosťou, nízkou spotrebou energie, žiadnou fázovou zmenou, nie je potrebné pridávať žiadne chemické činidlá, jednoduchá obsluha, mierne podmienky, schopnosť lepšie udržať aktivitu biologických makromolekúl, vysoká miera regenerácie a ďalšie výhody a jeho použitie pri separácii a čistení proteínov má jedinečné výhody.

 

Ultrafiltrácia je metóda membránovej filtrácie, ktorá využíva poréznu membránu ako separačné médium a spolieha sa na tlakový rozdiel medzi dvoma stranami membrány ako hnaciu silu na oddelenie látok s rôznymi molekulovými hmotnosťami v roztoku, čím hrá úlohu pri odsoľovaní, koncentrácii a čistenie. Ide o novú metódu vyvinutú v posledných rokoch, ktorá je najvhodnejšia na zahusťovanie alebo odsoľovanie biologických makromolekúl, najmä bielkovín a enzýmov. Kľúčom k použitiu ultrafiltrácie je výber membrány, rôzne typy a špecifikácie membrány, rozdiel v rýchlosti prietoku vody, medznej molekulovej hmotnosti a ďalších parametroch, musí sa vybrať podľa príslušných pracovných potrieb. Okrem toho má určitý vplyv na účinok ultrafiltrácie forma ultrafiltračného zariadenia, zloženie a vlastnosti rozpustenej látky, koncentrácia roztoku atď.

 

Aplikácia technológie ultrafiltrácie na odsoľovanie a zahusťovanie bielkovín v procese čistenia bielkovín sa vyznačuje vhodnosťou na úpravu veľkých množstiev kvapalín v rozmedzí od niekoľkých stoviek až po niekoľko tisíc litrov s výhodami jednoduchosti obsluhy, časovej náročnosti. a vysoká miera regenerácie bielkovín. Metóda ultrafiltrácie vychádza z ultrafiltračných skúmaviek pre laboratórne mikroobjemové spracovanie, ultrafiltračných nádob pre maloobjemové spracovanie a ultrafiltračných systémov pre priemyselné využitie.

 

Ultrafiltrácia sa delí na priamu tlakovú ultrafiltráciu a filtráciu s tangenciálnym tokom av súčasnosti sa filtrácia s tangenciálnym tokom používa hlavne v priemysle, ktorý sa široko používa pri odsoľovaní a výmene pufra.

 

Nasleduje príklad aplikácie ultrafiltračných membránových kaziet Guidling Technology pri odsoľovaní a koncentrácii proteínov.

 

Použili sme {{0}}.11㎡ membránovú kazetu s veľkosťou pórov 10 kd (G01100010K) na odsolenie a zahustenie 500 ml roztoku rastového hormónu modifikovaného PEG s koncentráciou 0,2 mg/ml. Počas procesu ultrafiltrácie sa skúmala rýchlosť odsoľovania, rýchlosť regenerácie proteínov, stav zlyhania membránového toku a rýchlosť regenerácie toku vody.

 

Pred a po použití sme testovali prietok vody membránovou kazetou oddelene a miera regenerácie membránových kaziet dosiahla 98 % za predpokladu udržania rovnakej rýchlosti privádzania, tlaku privádzania a tlaku spätného toku.

 

Celý proces spracoval celkovo 2 l materiálu a trval 40min, 0-5min bol proces koncentrácie, 5-35min bol proces výmeny kvapaliny a 35-40min. bol proces nadmernej koncentrácie. Počas procesu ultrafiltrácie bol TMP stabilizovaný medzi 0.{7}0,8 bar, rýchlosť podávania bola konštantná a priemerný tok materiálu bol 27 LMH.

 

Výmena 2 l koncentrovanej kvapaliny na 60 ml, asi 33-krát koncentrovaná, miera odsoľovania dosahuje 99 %, miera výťažnosti dosahuje 80 %, po umytí zvýšenie o 50 ml kvapaliny, celková výťažnosť 88 %, priemyselná výroba podľa Výpočty mŕtveho objemu potrubia, pokiaľ je to možné, aby sa zvýšil počet opakovaní horného premývania, môže byť 3-krát všeobecné horné premývanie úplne obnovené.

 

Membránové kazety Guidling Technology sú vyrobené z inertných materiálov lekárskej kvality so silnou odolnosťou proti korózii a vydržia silné alkalické čistenie; použitie automatizovaného výrobného procesu zaisťuje kontinuitu a spoľahlivosť kvality produktu, vyššiu mechanickú pevnosť, odolnosť proti spätnému tlaku a výkon pri opakovanom oplachovaní; má super hydrofilnosť, ktorá môže poskytnúť membráne vyšší tok a nižšiu adsorpciu proteínov; máme tiež optimalizovaný dizajn prietokového kanála s menším poklesom tlaku, ktorý uľahčuje prenos materiálu a výrazne skracuje čas filtrácie.

 

Naše membránové kazety sú dostupné v širokej škále veľkostí pórov, od 1kd do 1000kd. Medzi nimi 1-10kd ultrafiltračné membránové kazety možno použiť na odsoľovanie a odstraňovanie pyrogénov; Kazety s ultrafiltračnou membránou 30 000 sa môžu použiť na koncentráciu monoklonálnej protilátky a nahradenie pufra; zároveň sa naše produkty z dutých vlákien dajú použiť aj na koncentráciu a náhradu biologických látok s veľkosťou pórov 100 kd, 300 kd a 500 kd, ktoré sa používajú hlavne na veľké množstvo aplikácií vo vakcínových produktoch.

 

Guidling Technology je národný high-tech podnik so zameraním na biofarmaceutiká, bunkovú kultúru, čistenie a koncentráciu biomedicíny, diagnostiky a priemyselných tekutín. Úspešne sme vyvinuli odstredivé filtračné zariadenia, ultrafiltračné a mikrofiltračné kazety, vírusový filter, TFF systém, hĺbkový filter, duté vlákno atď., ktoré plne spĺňajú aplikačné scenáre biofarmaceutík, bunkových kultúr atď. Naše membrány a membránové filtre sú široko používané pri koncentrácii, extrakcii a separácii predfiltrácie, mikrofiltrácie, ultrafiltrácie a nanofiltrácie. Naše mnohé produktové rady, od malých jednorazových laboratórnych filtrácií až po výrobné filtračné systémy, testovanie sterility, fermentáciu, bunkové kultúry a ďalšie, spĺňajú potreby testovania a výroby. Guidling Technology sa teší na spoluprácu s vami!