Následný purifikačný proces vakcíny proti hnačke ošípaných

Hnačka je jednou z troch hlavných chorôb, ktoré spôsobili veľké ekonomické straty bravčovému priemyslu v Číne. Existuje mnoho faktorov spôsobujúcich hnačku u ošípaných a vírusové faktory sú najzávažnejšie. Môžu byť infikované ošípané všetkých vekových skupín, najmä ciciaky, a úmrtnosť po infekcii môže dosiahnuť viac ako 50%. Vírus epidemickej hnačky ošípaných (PEDV) a vírus prenosnej gastroenteritídy ošípaných (TGEV) sú vo svete rozšírené a tieto dva vírusy môžu byť infikované jednotlivo alebo v kombinácii. V súčasnosti neexistujú žiadne špecifické lieky na liečbu PEDV a TGEV a prevencia a kontrola hnačky ošípaných sú hlavne komerčné vakcíny.

Tradičné vakcíny proti epidemickej hnačke ošípaných zahŕňajú hlavne celovírusovú inaktivovanú vakcínu a živú atenuovanú vakcínu. Klinicky sa bežne používa PEDV a TGEV tandemová inaktivovaná vakcína alebo atenuovaná vakcína a PEDV, TGEV a prasačí rotavírus (RV) trojitá inaktivovaná vakcína alebo atenuovaná vakcína, väčšinou PEDV a TGEV tandemová vakcína.

V súčasnosti existuje v Číne veľa vakcín proti epidemickej hnačke ošípaných.

Výrobný proces inaktivovaných a atenuovaných vakcín je podobný, zahŕňa najmä päť krokov kultivácie patogénu, inaktiváciu alebo oslabenie patogénu, extrakciu a čistenie patogénu, prípravu a balenie vakcíny a kontrolu kvality vakcíny. Tento článok predstavuje hlavne postup čistenia patogénov.

Objasnenie

Účelom čírenia je zabezpečiť odstránenie zvyškov buniek a iných zhlukov veľkých častíc. Pri produkcii rôznych jedov v bunkovej kultúre okrem toho, že obsahuje veľké množstvo vírusových častíc, existuje veľa zvyškov bunkového tkaniva a metabolických produktov a iných nečistôt, vďaka čomu je jed v stave zamračeného alebo polooblačného stavu priamym použitie tejto operácie koncentrácie jedu čoskoro zablokuje ultrafiltračnú membránu a nemôže dokončiť koncentráciu jedu, čo vedie k odpadu ultrafiltračnej membrány. Preto pred koncentráciou jedu musí byť najprv vyčírený, čo sa zvyčajne robí nízkorýchlostnou centrifugáciou a membránovou filtráciou. Je potrebné poznamenať, že pri použití technológie membránovej separácie je v dôsledku membránového materiálu často s elektronegatívnosťou alebo hydrofóbnymi skupinami potrebné skúmať, či má materiál membrány adsorpciu na vírusové častice.

Účinný krok čírenia vyžaduje kombináciu vysokej kapacity odstraňovania pevných častíc a vysokého výťažku produktu, ľahkej amplifikácie a ochrany neskorších prevádzkových jednotiek. V súčasnosti sa na čistenie používa hlboký filter.

Ak je však kultivačný rozsah príliš veľký, bude potrebný veľký počet hlbokých filtračných membrán, čo vedie k podstatnému zvýšeniu nákladov na spotrebný materiál. Vysoká hustota bunkovej kultúry zároveň zníži zaťaženie membrány hlbokého filtra, čo má za následok zvýšené náklady a nadmerné riedenie produktu.

Metóda mikrofiltrácie využíva hlavne filtračné zariadenie s tangenciálnym prietokom a membránové komponenty sú plochá membránová kazeta a duté vlákno. Tangenciálna prietoková filtrácia (TFF) je riadená transmembránovým tlakovým rozdielom. Látky a nečistoty menšie ako veľkosť pórov membrány prechádzajú cez membránu, zatiaľ čo nečistoty ako bunky s väčšími časticami sa zachytávajú. Veľkosť pórov membrány použitej na mikrofiltráciu je {{0}},45/0,22μm. Mikrofiltrácia s tangenciálnym prietokom s dutým vláknom môže priamo spracovať kvapalinu s vysokým obsahom pevných látok, ako je médium na kultiváciu buniek s vysokou hustotou, môže eliminovať kroky odstreďovania a predfiltrácie s menším počtom krokov a jednoduchou obsluhou, membrána sa môže používať opakovane prostredníctvom čistenia, čím sa znižuje investícia do zariadenia a prevádzka náklady, v súlade s požiadavkami modulárnej automatizovanej výroby.

Koncentrácia a čistenie

Po predbežnom vyčírení obsahuje kultivačné médium vírusu stále veľké množstvo nečistôt, vrátane defektných častíc, vírusového obalu, cytotoxínu, média, séra a bunkových fragmentov atď. Ak sa tieto nečistoty vstreknú do zvierat, ovplyvnia nielen účinnosť vakcínou, ale tiež spôsobujú silnú imunitnú odpoveď hostiteľa a dokonca vedú k smrti očkovaných zvierat. Preto je potrebná koncentrácia a purifikácia na odstránenie nečistôt, ako sú heteroproteíny a bunkové fragmenty, zosilnenie a vyvolanie účinných imunitných reakcií, zníženie množstva použitej vakcíny a zníženie nežiaducich reakcií.

Princíp purifikácie vírusu: zachovať biologickú aktivitu a infekčnosť vírusu ako predpoklad, odstrániť vírusové nečistoty a extrahovať vysokú čistotu vírusu.

V súčasnosti sú hlavnými metódami koncentrácie a čistenia používanými pri výrobe vo veľkom meradle ultrafiltrácia.

Metóda ultrafiltrácie, používa hlavne ultrafiltračné zariadenie s tangenciálnym tokom, filtračný systém s dutými vláknami a iné filtračné zariadenie, za normálnych okolností môže aplikácia metódy ultrafiltrácie spôsobiť, že sa vírus koncentruje viac ako 100-krát, rýchlosť odstraňovania heteroproteínu je až 99%. Medzi nimi má technológia membránovej filtrácie dutých vlákien výhody miernej a nízkej šmykovej sily, ľahkého upchávania, flexibilnej prevádzky, dlhej životnosti a nízkych nákladov a ľahkého zosilnenia, preto sa odporúča zvoliť duté vlákno na koncentráciu a čistenie vírusov.

Keď sa na koncentráciu a čistenie používa ultrafiltračná metóda, je veľmi dôležité vybrať vhodnú veľkosť pórov membrány, ktorá priamo určuje účinnosť a kvalitu koncentrácie. Na jednej strane je potrebné zvoliť membránovú apertúru, aby účinne zachytila ​​cieľové molekuly, aby sa zabezpečil výťažok, a na druhej strane by sa mal plne zvážiť efekt odstraňovania a rýchlosť spracovania heteroproteínov. Preto je najlepším princípom vybrať membránu s najväčšou veľkosťou pórov, ktorá dokáže zachytiť cieľovú molekulu, a pokúsiť sa vybrať filtračnú membránu s rovnomernou distribúciou veľkosti pórov.

Vírus epidemickej hnačky ošípaných (PEDV) a vírus prenosnej gastroenteritídy (TGEV) sú koronavírusy, čo sú polymorfné guľôčky s prevrátenými hrotmi podobnými hrotom v rozsahu od 60 do 190 nm. Rotavírusové ochorenie je zoonotické ochorenie, pri ktorom má rotavírus (RV) vzhľad podobný koliesku a má priemer približne 70 nm. Tieto tri vírusy možno vo všeobecnosti zachytiť pomocou 100-750kd apertúrových ultrafiltračných membrán.

Guidling Technology je národný high-tech podnik so zameraním na biofarmaceutiká, bunkovú kultúru, čistenie a koncentráciu biomedicíny, diagnostiky a priemyselných tekutín. Úspešne sme vyvinuli odstredivé filtračné zariadenia, ultrafiltračné a mikrofiltračné kazety, vírusový filter, TFF systém, hĺbkový filter, duté vlákno atď., ktoré plne spĺňajú aplikačné scenáre biofarmaceutík, bunkových kultúr atď. Naše membrány a membránové filtre sú široko používané pri koncentrácii, extrakcii a separácii predfiltrácie, mikrofiltrácie, ultrafiltrácie a nanofiltrácie. Naše mnohé produktové rady, od malých jednorazových laboratórnych filtrácií až po výrobné filtračné systémy, testovanie sterility, fermentáciu, bunkové kultúry a ďalšie, spĺňajú potreby testovania a výroby. Guidling Technology sa teší na spoluprácu s vami!